分枝杆菌属是一类细长或略带弯曲、呈分枝状生长的需氧杆菌。主要特点是细胞壁含有大量脂类,这与其染色性、抵抗力、致病性等密切相关。耐受酸,一般不易着色,若经加温或延长染色时间而着色后,能抵抗3%盐酸酒精的脱色作用,故又称抗酸杆菌。 本属细菌无内外毒素,其致病性与菌体某些成分如索状因子、蜡质D及分枝菌酸有关。
一、结核分枝杆菌 结核分枝杆菌简称结核杆菌,是引起人和动物结核病的病原菌。目前已知在我国引起人类结核病的主要有人型和牛型结核分枝杆菌。 (一)生物学特性1.形态与染色 抗酸染色菌体呈红色。显微镜下常堆积成团、成束,排列无序。既往在组织中曾发现革兰阳性的非抗酸颗粒,接种动物可产生典型的结核病变,后被称为Much颗粒。金胺“O”等染色,在荧光显微镜下菌体可发生荧光。 结核分枝杆菌抗酸染色 结核分枝杆菌金胺“O”染色
2.培养特性 本菌专性需氧,最适pH为6.5~6.8。兼性胞内寄生菌,本菌生长缓慢,为18h分裂一代。在固体培养基(罗-琴Lowenstein-Jensen)上,一般需2~6周才能长出菌落。在液体培养基中形成菌膜。结核分枝杆菌营养要求较高,必须在血清、卵黄、马铃薯、甘油以及某些无机盐类的特殊培养基上才能生长。 罗-琴(Lowenstein-Jensen)
3.生化反应 各型结核杆菌均不发酵糖类,能产生过氧化氢酶,耐热触酶试验、聚山梨酯-80水解试验和耐热磷酸酶试验均为阴性,脲酶试验和中性红试验均为阳性。 人型结核分枝杆菌烟酸试验、硝酸盐还原和烟酰胺酶试验均为阳性,借此可与牛型结核分枝杆菌鉴别。
(二)临床意义1.致病性 结核分枝杆菌主要通过呼吸道、消化道和受损伤的皮肤侵入易感机体,引起多种组织器官的结核病,其中以通过呼吸道引起的肺结核最多见。该菌不产生内毒素和外毒素。2.Koch现象 将有毒结核分枝杆菌初次接种于健康豚鼠,不产生速发型过敏反应,而经10~14d,局部逐渐形成肿块,继而坏死,溃疡,直至动物死亡。若在8~12周之前给动物接种减毒或小量结核分枝杆菌,第二次接种时则局部反应提前,于2~3d内发生红肿硬结,后有溃疡但很快趋于痊愈。此现象为Koch在年观察到的,故称为Koch现象。3.结核菌素试验 利用Ⅳ型变态反应的原理,检测机体是否感染过结核杆菌。
(三)微生物检验1.标本采集 可采集痰、尿、粪便、胃液、胸腔积液、腹水、脑脊液、关节液、脓液等。2.检验方法 (1)涂片检查1)直接涂片:挑取痰或其他处理过的标本涂抹于载玻片上,用萋-尼抗酸染色,镜检,报告方法:-:全视野(或个视野)未找到抗酸菌;+:全视野发现3~9个;++:全视野发现10~99个;+++:每视野发现1~9个;++++:每视野发现10个以上。2)集菌涂片。主要方法有沉淀集菌法和漂浮集菌法。3)荧光显微镜检查法:用金铵“O”染色,在荧光显微镜下分枝杆菌可发出荧光。
(2)分离培养:培养前针对标本应做适当的前处理,如痰可做4%H2SO4或4%NaOH处理20~30min,除去杂菌再接种予罗氏培养基,37℃培养,定时观察,至4~8周。此方法可准确诊断结核杆菌。 (3)基因快速诊断:PCR、16srRNA基因序列测定,高效液相色谱(HPLC)。简便快速、灵敏度高、特异性强。但需注意实验器材的污染问题,以免出现假阳性。 (4)耐药性:利福平耐药是由rpoB的基因突变导致,链霉素耐药和编码核糖体S12蛋白的rpsl基因发生突变以及编码16SrRNA的rrs基因发生突变有关,异烟肼的耐药与过氧化氢酶和过氧化物酶的失活有关。 治疗原则 利福平、异烟肼、乙胺丁醇、链霉素为第一线药物。利福平与异烟肼合用可以减少耐药的产生。对于严重感染,可用毗嗪酰胺与利福平及异烟肼联合使用。
二、非典型分枝杆菌分枝杆菌属中除结核杆菌和麻风杆菌以外,均称非典型分枝杆菌。其染色性同样具有抗酸性,其临床症状、X线所见很难与肺结核病区别,而大多数非典型分枝杆菌对主要抗结核药耐药,我国近年来发现率也有增高趋势。以第Ⅲ群鸟-胞内分枝杆菌和第Ⅳ群偶发分枝杆菌及龟分枝杆菌为多。
三、麻风分枝杆菌 麻风分枝杆菌(M.Leprae)简称麻风杆菌,是麻风病的病原菌。亦为抗酸杆菌,但较结核杆菌短而粗。为胞内寄生菌,该菌所在的细胞胞质呈泡沫状,称麻风细胞。革兰阳性无动力、无荚膜和芽胞。 麻风分枝杆菌是麻风的病原菌,麻风是一种慢性传染病,早期主要损害皮肤、黏膜和神经末梢,晚期可侵犯深部组织和器官,此菌尚未人工培养成功,已用犰狳建立良好的动物模型。人类是麻风分枝杆菌的唯一宿主,也是唯一传染源。 麻风病根据机体的免疫、病理变化和临床表现可将多数患者分为瘤型、结核样型和界线类综合征。 治疗原则:早发现,早治疗。治疗药物主要有砜类、利福平、氯苯吩嗪及丙硫异烟胺。一般采用二或三种药物联合治疗。
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